Лдг в цитоплазмі культури фек, інфікованої онковірус а12

У цитоплазмі культури ФЕК, інфікованої онковірус А12, ЛДГ5 не знайдено, а ЛДГ4 зникала на 18-й і 24-й дні інфекції. В інші дні активність ферменту була менше як в порівнянні з нормою, так і в порівнянні з активністю в клітинах ФЕК, зараженої вірусом А6.

Активність ЛДГ1 істотно знизилася в цитоплазмі на 24-й день (в 1,6 рази), а ЛДГЗ зменшилася в 1 1/2 рази на 18-й день і 1,3 рази на 24-й день як в порівнянні з нормою, так і з активністю в клітинах ФЕК, зараженої А6. У ядерній фракції на 5-й і 18-й дні після інокуляції вірусу А12 в культуру ФЕК було виявлено достовірне збільшення активності МДГ1, активність МДГ2 підвищувалася на 3-й, 5-й і 8-й дні, а МДГЗ - на 3-й і 24-й дні.

У цитоплазмі під дією онковірус активність МДГЗ зростала на 3-й і 24-й дні інфекції.

Таким чином, дія інфекційних і онкогенних вірусів викликає перебудову в ізоферментних спектрах ферментів енергетичного обміну як в ядерній фракції, так і в цитоплазмі.

Ці порушення виявляються з перших днів взаємодії клітин культури ФЕК з вірусом. Орі контакті з онкогенним вірусом ОЙІ виражені більше, ніж при контакті з інфекційним.

Підвищення активності деяких ферментів енергетичного обміну в цитоплазмі (у порівнянні з ядерної фракцією) при зараженні інфекційним і онкогенним вірусами, ймовірно, можна пояснити більш високим рівнем гликолитических процесів, стимульованих онковірус в трансформованих клітинах. Важливо підкреслити, що ці зрушення в регуляції синтезу ізоформ досліджених ферментів не пов`язані з проліферативним зростанням культури клітин, а обумовлені саме впливом вірусу на клітину. Можливо, вони відбуваються внаслідок епігеномний перебудови під впливом онковірус.

Особливий інтерес представляють дані порівняльного аналізу зрушень у ізоформах досліджуваних ферментів в культурах клітин ФЕК, інфікованих вірусом А12, і в клітинах сарком А12 і ретікулосаркому 321-ВРХ, що ростуть in vitro.

Встановлено, що в клітинах саркоми А12 в ядерній фракції переважає гексокіназа 3. Загальна активність ферменту в цитоплазмі клітин була вище, ніж в ядрі. Аналогічні зрушення відзначені нами і в процесі трансформації клітин ФЕК, інфікованих цим же вірусом.

Дивіться малюнок - активність ПК

Дивіться малюнок - Електрофореграми і денсітограмми изоферментов ГК (1 - 3) в глобулиновой фракції ядер клітин культури ФЕК

а - в ядерній фракції iv vitro- б - в системі in vivo- в - в цитоплазмі in vivo.

Ферменти ГК (1 - 3) в щурячої ретикулосаркоме ВРХ - 321

Ізоферментний спектр ЛДГ в ядрах клітин саркоми А12 представлений двома формами, з яких переважала ЛДГ1. У цитоплазмі виявлені 4 ізоферменту.

Малатдегідрогеназа в ядрі в цитоплазмі клітин саркоми А12 представлена трьома ізоферментами. У ядерній фракції їх кількість приблизно однакове, а в цитоплазмі переважала МДГЗ.

а - в ядерній фракції in vitro- б - в системі in vivo- в - в цитоплазмі in vivo- r - в культурі.

Для ретікулосаркоми щурів 321-ВРХ загальна активність гексокінази в цитоплазмі клітин була вище, ніж в ядрі (8,5 і 2,8 мкмоль).

У ядерній фракції переважала гексокіназа 3.

Дивіться малюнок - Ферменти ГК (1 - 3) в щурячої ретикулосаркоме ВРХ - 321

а - в ядерній фракції- б - в цитоплазмі.

Ізоферментний спектр ЛДГ в клітинах цієї саркоми був представлений двома ізоферментами як в цитоплазмі, так і в ядерній фракції. Активність кожного з ізоферментів (ЛДП і ЛДГ2) в ядрі була вище їх активності в цитоплазмі в культурі.

Ферменти ЛДГ (1 - 2) в щурячої ретикулосаркоме КРС-321

Електрофореграми і денсітограмми ізоферментів ЛДГ (1 - 2)
в щурячої ретикулосаркоме КРС-321 in vivo

Малатдегідрогеназа в клітинах саркоми 321-ВРХ виявлено в трьох формах і в ядерній фракції, і в цитоплазмі. У ядерній фракції зміст МДГЗ було значно нижче, ніж кількість двох інших ізоферментів. У цитоплазмі клітин переважала МДГ2. Виявилося, що в ядерній фракції рівень МДГ1 і МДГЗ був вище, ніж рівень цих ізоферментів в цитоплазмі клітин культур.

Дивіться малюнок - Ферменти ЛДГ (1 - 2) в щурячої ретикулосаркоме КРС-321

Дивіться малюнок - Електрофореграми і денсітограмми ізоферментів ЛДГ (1 - 2) в щурячої ретикулосаркоме КРС-321 in vivo

Таким чином, дослідження в динаміці молекулярних форм ферментів енергетичного обміну в культурі, зараженої онкогенним аденовирусом 12-го твань, і в саркомах А12 і 321-ВРХ дозволило виявити загальні риси в зміні кожного з вивчених ферментів. Найбільш контрастними були зміни гексокінази. Перш за все вони виражалися в підвищеному вмісті ферменту в цитоплазмі в порівнянні з його рівнем у ядрі клітин культури ФЕК при появі вогнищ морфологічної трансформації.

Відзначено переважання гексокінази 3 над іншими ізоферментами в ядерній фракції. Ідентичні результати отримані і на інших тест-системах. Так, значне підвищення відносного вмісту гексокінази 3 в клітинах гепатоми Морріса корелювало зі збільшенням ступеня злоякісності досліджених новоутворень. Цей изофермент був переважаючим також в карцинома молочної залози, нирки, в рабдоміосаркома людини (В. С. Шапот, 1975).

Гексокіназа надається особливе значення, так як припускають, що в поверхневих мембранах ракових клітин локалізована гексокіназа з підвищеною спорідненістю до глюкози, ймовірно, переважно цей ізофермент виходить в навколишнє середовище.

Можливо, збільшення вмісту гексокінази, що забезпечує підвищення потенційної здатності до гликолизу, пов`язане з малигнизацией клітин. У ядрах клітин ФЕК, заражених онкогенним вірусом А12, спектр ізоформ лактатдегідрогенази більш спрощений, ніж в цитоплазмі, за рахунок швидко мігруючих ізоферментів. Малатдегідрогеназа в цих же клітинах представлена трьома формами як в ядрі, так і в цитоплазмі. В обох фракціях зміст МДГЗ було підвищено. Аналогічні зміни спектрів ЛДГ і МДГ спостерігалися і в культурі клітин сарком А12.

Таким чином, зміни ізоферментних спектрів гексокінази, ЛДГ і МДГ в розчинній ядерної фракції і цитоплазмі клітин ФЕК під впливом ДНК-яке містить онковірус свідчать про посилення гликолитических процесів, які характерні для малігнізуватися тканини.

Отже, виявлені зрушення можна використовувати в якості об`єктивних ознак трансформації клітин. Припускають, що підвищення активності гексокінази і стимуляція гліколізу на ранніх стадіях трансформації клітин ФЕК під дією онковірус є основною властивістю бластомогенних процесу, можливо, обумовленим нерегульованим процесу проліферації клітин.