Гістохімічна діагностика базується на визначенні активності тканинної ацетилхолінестерази (АХЕ). Принципова основа методу закладена в середині 50-х років, коли при порівнянні рівня АХЕ-активності в різних ділянках товстої кишки при хворобі Гіршпрунга було встановлено 2-4-кратне його підвищення в дистальному агангліонарной сегменті в порівнянні з проксимальним розширеним [Kamio J. et al ., 1953].
У наступні роки методика виявлення АХЕ поступово удосконалювалася до ступеня, що дозволяє користуватися нею для діагностики [Meier-Ruge W., 1968].
В даний час діагноз хвороби Гіршпрунга підтверджують шляхом поверхневої біопсії ректальної слизової оболонки і виявлення підвищення АХЕ-активності в парасимпатичних нервових волокнах Lamina propria і м`язах слизової оболонки.
Активність тканинної АХЕ оцінюється в такий спосіб [Ісаков Ю. Ф. та ін., 1985]:
- негативна - в власне м`язовому шарі слизової оболонки невелика кількість АХЕ-позитивних волоконец- в слизовій оболонці товстої кишки АХЕ-позитивних волокон ні-слабо позитивна - в власне м`язовому шарі слизової оболонки невелика кількість АХЕ-позитивних волокон, частина з них представлена у вигляді рідко розташованих волоконец в слизовій оболонці;
- позитивна - АХЕ-позитивних волокон в власне м`язовому шарі слизовій оболонці трохи більше, а в слизовій оболонці вони чітко простежуються, але їх кількість значно більше-різкопозитивна - в власне м`язовому шарі слизової оболонки велика кількість АХЕ-позитивних волокон, які проникають в слизову оболонку , утворюючи густу мережу між залозами.
Гістохімічна діагностика найбільш виправдана у випадках хвороби Гіршпрунга з коротким і суперкороткі агангліонарном сегментом. При цьому велике значення має місце взяття біопсій. Доцільно забирати матеріал з декількох їх ділянок.
Першу біопсію необхідно брати з точки на 1,5-2 см вище анального каналу, другу - на 2-2,5 см вище першої і третю - на 2-2,5 см вище другий. Комплексне використання рентгенологічного, функціонального і гістохімічного методів дослідження дозволяє встановити діагноз хвороби Гіршпрунга з 100% вірогідністю.