Біохімічні та імунологічні методи дослідження

Відео: Імуноферментний аналіз

В.Ю. Мішин

біохімічні дослідження проводять з метою оцінки характеру туберкульозного процесу, прогнозування його перебігу, виявлення ускладнень і супутньої патології.

Для оцінки активності процесу і запальних процесів рекомендується визначати в сироватці крові вміст гаптоглобіну (Нр), церулоплазміну (ЦП) і С-реактивного білка (СРБ), білкових фракцій сироватки крові і al-антитрипсину (al-AT).

Відео: Лікар-ендокринолог Ася Вергазова. Проблема випадання волосся

Кількісну оцінку ступеня інтоксикації організму проводять шляхом вимірювання рівня молекул середньої маси (МСМ) у сироватці крові. У зв`язку зі значною частотою цукрового діабету і прикордонних порушень вуглеводного обміну у хворих на туберкульоз в комплекс обов`язкових досліджень обов`язково включають визначення рівня глікемії натщесерце і зміст рівня глікозильованого гемоглобіну.

Оскільки сучасна хіміотерапія представляє значне навантаження для печінки, а сам туберкульозний процес часто супроводжується параспецифічними її ураженнями, комплекс первинних біохімічних досліджень повинен включати тести для оцінки збереження паренхіми печінки, її антитоксичної, белоксинтезирующей і жовчовидільної функцій (визначення білірубіну, АЛТ, ACT, ЛФ, тимолової проби).

З огляду на, що головним шляхом виведення ліків з організму є нирки, а при туберкульозі відзначаються різні варіанти нефропатій, при первинному дослідженні необхідно визначити рівень сечовини в крові для виключення декомпенсированной ниркової недостатності.

Беручи до уваги значну частоту латентно протікає внутрішньосудинної коагуляції крові у хворих на туберкульоз легень, її негативний вплив на процеси загоєння і можливість розвитку тромбогеморрагических ускладнень, у всіх хворих оценвают стан системи гемостазу за даними тромбоеластограмми і вмістом у крові фібриногену.

імунологічні дослідження застосовують для оцінки стану основних систем імунітету, визначення їх клітинних структур, а також ступеня розвитку специфічних імунологічних реакцій. Ці дані сприяють вирішенню ряду завдань:

• визначенню активності туберкульозного процесу;
• визначенню характеру перебігу захворювання;
• проведення диференціальної діагностики;
• виявлення імунологічної недостатності;
• визначення показань до призначення імуномодулюючої терапії;
• діагностиці лікарської непереносимості, що виникає в процесі хіміотерапії.

Для оцінки імунного статусу хворих на туберкульоз використовують набір імунологічних методів.

Тести для оцінки кількісного стану CD3 + і CD22 + клітин (Т- і В-лімфоцитів) ірегуляторних субпопуляцій CD4 + і CD8 + клітин (Т-хелперів ІТ супресорів):

• використовують реакцію розеткоутворення з баранячими еритроцитами або моноклональні антитіла проти поверхневих маркерів CD3 +, CD22 +, CD4 + і CD8 + лімфоцитів. У нормі CD3 + клітини складають 60-70%, CD22 + клітини - 15-20%, CD4 + клітини - 35-65% і CD8 + клітини - 10-30%. Індекс співвідношення CD4 +: CD8 + = 1,8-2,2.

Тести для оцінки функціональної активності сенсибілізованих до відповідних антигенів Т-лімфоцитів in vitro:

• реакція стимуляції Т-лімфоцитів мітогеном фітогемаглютиніном (РБТЛ з ФГА), який викликає неспецифічну бласттрансформаціі і мітози Т-лімфоцитів, свідчить про вираженість їх функціональної активності. Лімфоцити культивують з ФГА протягом 72 год і визначають включення ДТ-тимідину в ДНК за кількістю імпульсів в сцинтиляційних лічильнику. У нормі бласттрансформации піддаються 50-60% лімфоцитів;
• реакція стимуляції Т-лімфоцитів з туберкуліном (РБТЛ з ППД), який викликає специфічну стимуляцію і визначає ступінь сенсибілізації до мікобактеріальній антігенам- в нормі бласттрансформации піддаються 2-6% лімфоцитів.

Перспективним імунологічних дослідженням в діагностиці туберкульозу є РБТЛ з ППД і визначенням концентрації Іфна-у, який в нормі становить 140 ОД / мл.

Тести на визначення функціональної, міграційної та адгезивної активності фагоцитів (лейкоцити імакрофагі):

• реакція гальмування міграції лейкоцитів з туберкуліном in vitro (РТМЛ з PPD) в капілярах. У нормі індекс активності становить 0,8-1,2.

Показниками імунодефіциту за наведеними вище імунологічних тестів є: кількість CD3 + клітин lt; 50% - кількість CD4 + клітин lt; 30% - кількість CD8 + клітин gt; 30% при їх співвідношенні CD4 +: CD8 + lt; 1,5 кількість бласттрансформірованн | ьгх лімфоцитів на ФГА lt; 50%, на PPD lt; 2% - гальмування міграції макрофагів з PPD lt; 20%.

Тести на виявлення антигенів МБТ і антитіл до них методом імуноферментного аналізу (ІФА):

• визначення протитуберкульозних антитіл в сироватці крові непрямим ІФА. В цьому випадку протитуберкульозні антитіла зв`язуються зі специфічним антигеном на пластиці, що утворює комплекс антиген - антитіло, який «проявляється» другим антитілом проти людського імуноглобуліну, міченого ферментом. Реакцію проявляють хромогенним субстратом. Чим інтенсивніше забарвлення, тим більше антитіл зв`язалося з антигеном;
• визначення антигенів МБТ в сироватки крові прямим ІФА. Антигени мікобактерій зв`язуються з гіперімунною кролячій сироваткою, що містить протитуберкульозні антитіла. Про наявність антигену судять за величиною ингибиции (в%) протитуберкульозних антитіл.

Слід зазначити, що діагностичне значення імунологічних тестів має обмежений характер з огляду на те, що позитивні дані цих тестів можуть бути у інфікованих здорових осіб і бути відсутнім у пацієнтів з явищами імунодефіциту.